NCMScript All-in-One RTpremix with dsDNase
一步法高效逆轉(zhuǎn)錄試劑盒
貨號(hào)：Cat.No: M7100 Size：100rxns
產(chǎn)品介紹
NCMScript All-in-One RTpremix with dsDNase 一款含去除基因組酶的一管式高效逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)品，可將 RNA 逆轉(zhuǎn) 錄成為 cDNA，含有第一鏈 cDN 合成所需的所有試劑，只需加入 RNA 模板和水即可進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。合成 的第一鏈 cDNA(最長(zhǎng)可達(dá) 15kd)可廣泛用于文庫(kù)構(gòu)建、第二鏈合成、雜交、PCR 擴(kuò)增、 RT-qPCR 檢測(cè)等。
產(chǎn)品組分
| 組成成分 | M7010 | M7100 |
| 5× RT Mix a | 40ul | 400ul |
| All-in-one Enzyme Mix b | 30ul | 300ul |
| DEPC-treated H2O | 400ul | 2×1 ml |
a. 包含 Buffer、dNTPs、Random Hexamer Primer/Oligo (dT)20 Primer Mix。
b. 包含 ExonScript Reverse Transcriptase、Ribonuclease Inhibitor 和 dsDNase。
操作步驟
1. 在 RNase-free 離心管中配制如下混合液，輕輕混勻并瞬離以下成分:
| 成分 | 體積 |
| 10 pg- 5 μg Total RNA or 10 pg- 500 ng mRNA c | 按需 |
| DEPC-treated H2O | up to 13ul |
| 5×RT Mix d | 4ul |
| All-in-one Enzyme Mix | 3ul |
| 總體積 | 20ul |
c. 為保證逆轉(zhuǎn)錄成功，請(qǐng)使用高質(zhì)量 RNA 模板。
d. 5× RT Mix 在使用前需充分混勻。
2. 按照下表所示進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng):
| 反應(yīng)溫度 | 反應(yīng)時(shí)間 | 目的 |
| 37°C e | 2min | 隨機(jī)引物與RNA 模板配對(duì)及去除基因組DNA |
| 55°C | 15min | 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)及 dsDNase快速滅活 |
| 85°C | 5min | 逆轉(zhuǎn)錄酶滅活 |
e. 復(fù)雜模板可以采用 25°C 10 min，充分讓引物和模板結(jié)合。
3. 產(chǎn)物可立即用于 PCR 或 qPCR，或-20°C 保存半年內(nèi)使用；長(zhǎng)期建議分裝在 -70°C 保存；cDNA 避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸和保存方式
冰袋低溫運(yùn)輸；-20°C 保存兩年。
