產(chǎn)品介紹
Bradford蛋白定量法是最簡單和快速的蛋白定量方法之一，可實現(xiàn)對濃度范圍在10-1000ug/ml的蛋白質(zhì)溶液經(jīng)行定量。該定量的原理是考馬斯藍染料與蛋白質(zhì)結(jié)合后，溶液的顏色發(fā)生變化（棕色變成藍色），結(jié)合物顏色的深淺與蛋白濃度的高低成正比關系，因而可通過檢測595nm的最大光吸收值的大小來計算蛋白的含量。本試劑盒可對含有還原劑的樣品經(jīng)行測定，但對于含有表面活性劑的樣品的測定結(jié)果不穩(wěn)定。
操作步驟
1.稀釋BSA標準品：用與待測蛋白樣品一致的稀釋液按下表稀釋BSA標準品。
管號 | 稀釋液用量（ul） | BSA標準品用量（ul） | BSA標準品最終濃度（ug/ml） |
A | 0 | 100 | 2,000 |
B | 50 | 150 | 1,500 |
C | 200 | 200 | 1,000 |
D | 200 | 200（從C管中取） | 500 |
E | 200 | 200（從D管中?。?/span> | 250 |
F | 200 | 200（從E管中取） | 125 |
G | 200 | 0 | 0(空白) |
2. 將按表1稀釋好的A-G BSA標準品和待測蛋白樣品（原液或稀釋液）各5ul分別加到作好標記的96孔微孔板中。
3. 每孔中加入200ul Bradford Dye Solution，充分混勻，蓋上96孔板蓋，室溫放置3-5分鐘。
注：Bradford Dye Solution 長時間放置可能會有沉淀產(chǎn)生，使用前晃動試劑瓶，使其重新混勻即可。
4. 酶標儀波長設定在595nm處經(jīng)行吸光值測定（測定時間盡量控制在反應后的1小時以內(nèi)）。
5. 各濃度的BSA標準品溶液的吸光值減去Blank值的平均值，繪制BSA標準品溶液的標準曲線，并根據(jù)BSA標準曲線計算出相應的檢測樣品的蛋白質(zhì)濃度。
6. 如果所得到的蛋白質(zhì)濃度不在檢測范圍內(nèi)，請重新稀釋樣品后再次進行測定。
保存條件
組分 | 規(guī)格 | 保存條件 |
Bradford Dye Solution | 100ml | 4℃ |
BSA Standard Solution（2mg/ml） | 2ml | 4℃ |
注意事項
1. 本產(chǎn)品可以采用分光光度計或酶標儀測定蛋白濃度
2. 建議每次測定蛋白樣品時，繪制標準曲線，獲得更準確數(shù)據(jù)
3. BSA標準品稀釋液需和待測樣品的稀釋液一致
4. 建議去除背景值后的吸光度值讀數(shù)繪制標準曲線，由于操作誤差導致標準品讀數(shù)嚴重偏離線性曲線的應舍去。
5. 如果得到的蛋白濃度不在檢測范圍內(nèi)，請重新稀釋樣品后再次測定。
