LipoEnter 高效轉(zhuǎn)染試劑 

貨號(hào)：Cat.No: C51500L Size：1.5 ml 

產(chǎn)品介紹

新賽美 LipoEnter 高效轉(zhuǎn)染試劑是一種新型陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，適合將 DNA 轉(zhuǎn)染入真核細(xì)胞。本試劑具 有低細(xì)胞毒性，高轉(zhuǎn)染效率，重復(fù)性好，操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，轉(zhuǎn)染時(shí)血清的存在不影響轉(zhuǎn)染效率，貼壁細(xì)胞 和懸浮細(xì)胞都適用。為取得最佳轉(zhuǎn)染效果，建議轉(zhuǎn)染時(shí)使用不含抗生素培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)染 4-6 h 后可去除轉(zhuǎn)染液。 

操作步驟 

對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來說，可以先以 DNA(μg)與 LipoEnter(μl)比例 1:2~1:3 進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，根據(jù)效果再進(jìn)行比例優(yōu)化。 為達(dá)到最高的轉(zhuǎn)染效率和降低細(xì)胞毒性的影響，可對(duì) DNA 和 LipoEnter 的比例以及細(xì)胞密度進(jìn)行優(yōu)化，建議 在 1:0.5~1:5 的范圍內(nèi)優(yōu)化 DNA (μg)和 LipoEnter 比例。 一般而言，轉(zhuǎn)染時(shí)高的細(xì)胞密度可以得到高的轉(zhuǎn)染 效率和表達(dá)水平，并能減少細(xì)胞毒性。

1. 以 24 孔板為例

貼壁細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天，用 500μl 不含抗生素培養(yǎng)基接種 0.5 ~2×105 細(xì)胞，使之第二天能達(dá)到 80-90%融合。 懸浮細(xì)胞：在準(zhǔn)備 DNA-LipoEnter 復(fù)合物之前，用 500 μ l 不含抗生素的培養(yǎng)基接種 4~8×105 細(xì)胞即可。

2. 對(duì)每個(gè)轉(zhuǎn)染樣品，進(jìn)行以下操作 

a. 在 eppendorf 管里分別加入 50 μl Opti-MEM I ReLipced Serum Medium 和 0.8 μg DNA 輕柔混勻(不能渦旋或 離心) ，制成 DNA 稀釋液。 

b. 在另一個(gè) eppendorf 管里分別加入 50μl Opti-MEMI ReLipced Serum Medium 和 2.0 μl LipoEnter（注意用前 先混勻)，輕柔混勻，制成 LipoEnter 稀釋液 ，室溫靜置 5 分鐘。

c. 將 DNA 稀釋液和 LipoEnter 稀釋液混合，輕柔混勻，室溫靜置 20 分鐘，形成 DNA-LipoEnter 復(fù)合物。DNA-LipoEnter 復(fù)合物在室溫下可穩(wěn)定存在 6 小時(shí)。 

3. 將 DNA-LipoEnter 復(fù)合物加入到接種好的細(xì)胞中，將培養(yǎng)板輕輕地前后搖動(dòng)，使復(fù)合物分散均勻。 

4. 在 37°C CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 4-6 小時(shí)后更換培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng) 18~48 小時(shí)。 

5. 如果要篩選穩(wěn)定細(xì)胞株，則在轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后將細(xì)胞按照 1 :10 或更高的比例接種到新鮮培養(yǎng)基中，第二 天加入選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。 

保存條件 

4°C 保存，避免冷凍，有效期 18 個(gè)月。 

注意事項(xiàng) 

1. 使用高純度 DNA 有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染前細(xì)胞必須處于良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。 

2. 需自備不含抗生素的無血清培養(yǎng)液或 Opti-MEM?培養(yǎng)液或普通的 DMEM 培養(yǎng)液。 

3. LipoEnter 不能 vortex 或離心，宜緩慢晃動(dòng)混勻。 4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。