分子生物學系列產(chǎn)品
TRnaZol RNA Kit (離心柱型）
總 RNA 柱式提取試劑盒
貨號：Cat.No: M5102 Size：100 Preps
產(chǎn)品介紹
TRnaZol RNA Kit 是一種快速高效的總RNA柱式 提取試劑盒。通過對產(chǎn)品的多重優(yōu)化，提高了裂解液的效果 和增強了提取的靈敏度，獲得純度更好，質量更高的總RNA。每個吸附柱可處理高達 50mg 組織，或 5X106 細胞 。在優(yōu)化的試劑中加入了RNA 保護劑，防止RNA 在操作過程中發(fā)生降解，使用RNA Extraction Buffer替代 氯仿，純化的RNA 可用于 Northern Blot，Dot Blot，PolyA 篩選，體外翻譯，RNase 保護分析和分子克隆。
產(chǎn)品特色
? 安全性高：使用RNA Extraction Buffer替代氯仿
? 產(chǎn)量高：最大程度地獲得樣品中的 RNA
? 純度高：DNA和蛋白質污染含量低，適用于各種下游實驗
? 操作快速：簡化操作步驟，快速完成RNA純化
操作步驟
準備試劑（自備）：無水乙醇等
1. 各種材料樣本的勻漿處理
（a）貼壁培養(yǎng)的細胞：吸去培養(yǎng)基，在培養(yǎng)板中直接加入適量的 TRnaZol Reagent（每 10cm
2
生長的培養(yǎng)細胞中
加入 1ml 的TRnaZol Reagent），水平放置片刻，便于裂解液均勻分布細胞表面裂解，再使用移液器吹打細胞并移至
收集管中。
注意：（1）收集細胞數(shù)量不要超過 5X10
6
/ml TRnaZol Reagent；
（2）TRnaZol Reagent加入量根據(jù)培養(yǎng)板面積確定，若是TRnaZol Reagent 加入量不足， 可能導致提取的 RNA 中有
DNA 污染。
（b）懸浮培養(yǎng)細胞：將懸浮培養(yǎng)的細胞和培養(yǎng)基一起移入離心管中，離心收集細胞，每 5X10
6
動植物、酵母或
細菌細胞加入TRnaZol Reagent。
注意：（1）部分酵母和細菌細胞可能需要勻漿儀或液氮研磨處理；或者需要使用溶菌酶進行裂解處理。
（2）加入 TRnaZol Reagent 前不要洗滌細胞，以免 RNA 降解。
（c) 動物、植物組織：取新鮮或-70℃冷凍的動植物組織在液氮中充分剪碎研磨，將研磨成粉狀的樣品轉移至離心管
中，每 20-50mg 組織加入 1ml TRnaZol Reagent，勻漿儀進行勻漿處理。
注意：（1）要在液氮等低溫下處理樣品組織，避免 RNA 降解；
（2）樣品體積一般不要超過 TRnaZol Reagent 體積的10%。
2. 樣品在加入 TRnaZol Reagent 后用移液器反復吹打幾次，直至裂解液中無明顯沉淀，使樣品充分裂解。室溫靜置
5min，使得蛋白質核酸復合物完全分離
注意：可選步驟 4-25℃，12,000rpm 離心 5 min，取上清，轉入一個新的 RNase-Free 的離心管中。（如果樣品中含有較
多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物結節(jié)部分等，可加此步驟離心去除。離心得到的沉淀中包括細胞外膜、多糖、高分子
量 DNA，RNA 存在于上清溶液）。
3. 向上述溶液中加入RNA Extraction Buffer，每使用 1ml TRnaZol Reagent加入 0.2ml RNA Extraction Buffer，劇烈振
蕩 15sec。
4. 12,000g, 4-25℃離心 10 min，此時樣品會分為三層：紅色有機相、中間層和上層無色水相。其中 RNA 主要在
水相中，將水相（約 500ul）轉移至一個新的 RNase-Free 的離心管中。
5. 在得到的無色水相 的離心管中，加入等體積的無水乙醇，混勻。將得到溶液 轉入吸附柱NcmSpin Column 中，4-25℃
12,000g離心30sec，若一次不能將全部溶液和混合物加入吸附柱NcmSpin Column，分兩次轉入吸附柱 NcmSpin
Column 中，4-25℃，12,000g 離心 30sec，棄掉收集管中的廢液。
6.向吸附柱 NcmSpin Column 中加入 500ul 漂洗液RWB（使用前請先檢查是否已加入指定體積無水乙醇），
12,000g 離心 30sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱 NcmSpin Column 放入收集管中。
7. 重復操作步驟 6。
8. 將吸附柱NcmSpin Column 放入收集管中，12,000g 離心2min，盡量除去漂洗液。將吸附柱置于室溫放置2min，徹
底晾干
注意：此步驟目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，如果有漂洗液殘留，可能會影響后續(xù)的 RT-PCR 等實驗操作。
9. 加入 30-50ul 的洗脫液 REB Elution Buffer （或者Rnase-Free Water)，室溫靜置 2min，4-25℃，12,000g
離心 1min。樣品保存于-70℃以備長期使用。
產(chǎn)品組分及保存條件
注意事項
1. 預防 RNase污染，如使用無 RNase 的塑料制品和槍頭，操作時要戴一次性口罩和手套，實驗過程中要勤換手套。
2. 加入RNA Extraction Buffer后，一定要充分振蕩，保證RNA 提取的效果。
3. 使用的樣本避免反復凍融，以免影響RNA 的產(chǎn)率和質量。
4. TRnaZol Reagent 含有苯酚，具有毒性和腐蝕性，使用本制品時要穿戴防護物品，避免吸入體內、接觸皮膚、吞
食等現(xiàn)象發(fā)生。如果不小心發(fā)生，應立即用大量的水沖洗并前往醫(yī)院治療。
5. 在漂洗液 RWB Wash Buffer 中加入指定量的無水乙醇（分析純），在試劑瓶上標注出，使用完畢后要擰緊試劑瓶
，防止乙醇揮發(fā)。
