產(chǎn)品介紹

NCMSpeed E.coli Transformation Kit 是新賽美生物科技有限公司研發(fā)可實(shí)現(xiàn)快速轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒，適用于實(shí)驗(yàn)室多種菌株，特別是 DH5α , JM109, DH10B, XL1-Blue 等。特殊的感受態(tài)試劑配方，使轉(zhuǎn)化效率可達(dá)到 10 8 -5X10 9 cfu/ug pUC19 DNA, 轉(zhuǎn)化整個(gè)過(guò)程不需冰浴、熱激和孵育等步驟，最快 30 秒即可

實(shí)現(xiàn)完美的轉(zhuǎn)化。

產(chǎn)品特色

1.轉(zhuǎn)化快：最快可 30 快速轉(zhuǎn)化，不需冰浴、熱激和孵育步驟。

2.效率高：達(dá)到 108 -5X10 9 cfu/ug pUC19 DNA。

3.穩(wěn)定性好：-70℃冰箱可保存一年時(shí)間。

4.安全性高：不需液氮處理，直接超低溫凍存即可。

操作步驟

以 50ml 的 E.coli 培養(yǎng)體積為例

感受態(tài)細(xì)胞制備操作步驟：

1. 將 0.5ml 新鮮過(guò)夜培養(yǎng)的 E.coli 菌接種于 50ml SOB 培養(yǎng)基中（1:100 比例接種），在搖床中以 25℃，250 rpm 條件下振蕩培養(yǎng)，直至 OD 600nm 達(dá)到 0.4-0.6。

★注意: 在 25℃，250 rpm 振蕩培養(yǎng)可提高感受態(tài)細(xì)胞的效率；制備感受態(tài)的 E.coli菌株應(yīng)處于生長(zhǎng)的對(duì)數(shù)期，即 OD 600nm 達(dá)到 0.4-0.6，大于 0.6 時(shí)的細(xì)菌狀態(tài)變差，小于0.4 時(shí)細(xì)菌量較少，均不適合制備感受態(tài)細(xì)胞。

2．將第一步中的 E.coli 培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至冰上，冰浴 10 分鐘預(yù)冷細(xì)菌。然后在 4℃條件下，3000rpm 離心 10 分鐘。

★注意：制備感受態(tài)細(xì)胞時(shí)所有步驟都要在低溫條件下進(jìn)行，操作時(shí)動(dòng)作要輕柔，不可劇烈地處理 E.coli 菌體。

3. 棄去離心后的上清，加入 15ml E.coli Competent Buffer, 輕柔地重懸細(xì)菌沉淀；重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟 2 的操作。

4. 徹底地棄去上清，加入 5ml E.coli Competent Buffer，輕柔地重懸細(xì)菌沉淀。

5. 在冰上以 100ul 或 200ul 的體積分裝 E.coli 的懸浮液，直接凍存感受態(tài)細(xì)胞至-70℃超低溫冰箱中（勿用液氮處理感受態(tài)細(xì)胞）。

轉(zhuǎn)化步驟

多種轉(zhuǎn)化形式可選：30 秒極速轉(zhuǎn)化；5 分鐘快速轉(zhuǎn)化；常規(guī)轉(zhuǎn)化。

保存條件

低溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期 12個(gè)月。

注意事項(xiàng)

1. E.coli 菌株影響感受態(tài)效率不同的菌株制備的感受效率差異不同，像 DH 5α ,JM109, DH10B,XL1-Blue ,XL10 Gold,TG1 等菌株，使用 NCMSpeed E.coli Transformation Kit 制備的感受態(tài)效率較高。

2. 菌株培養(yǎng)條件

菌株培養(yǎng)時(shí)，用營(yíng)養(yǎng)更豐富的 SOB 培養(yǎng)基；在 25℃，250rpm 振蕩培養(yǎng)，會(huì)使 E.coli菌處于最佳生長(zhǎng)狀態(tài)，更適宜用于制備感受態(tài)細(xì)胞

3. 預(yù)熱平板可提高轉(zhuǎn)化效率

在轉(zhuǎn)化前，將 4℃保存的平板轉(zhuǎn)移到 37℃培養(yǎng)箱中預(yù)熱一段時(shí)間，可提高轉(zhuǎn)化時(shí)的效率。

4. 轉(zhuǎn)化時(shí)加入 C SOC 培養(yǎng)基

在做轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)時(shí)，加入營(yíng)養(yǎng)豐富的 SOC 培養(yǎng)基至 DNA-感受態(tài)轉(zhuǎn)化混合液中，增強(qiáng)感受態(tài)細(xì)胞的生長(zhǎng)及吸收 DNA 的能力。

附錄：

SOB 培養(yǎng)基配制

1. 組份濃度：2%（W/V）Tryptone ；0.5%（W/V）Yeast Extract；0.05%（W/V）NaCl；2.5 mM

KCl；10 mM MgCl 2

2. 配制方法：

① 配制 250 mM KCl 溶解：在 90 ml 的去離子水中溶解 1.86 g KCl 后，定容至 100 ml。

② 配制 2 M MgCl 2 溶液：在 90 ml 去離子水中溶解 19 g MgCl 2 后，定容至 100 ml，高溫高壓

滅菌。

③ 稱取下列試劑，置于 1 L 燒杯中：Tryptone 20g；Yeast Extract 5g；NaCl 0.5 g 。

④ 加入約 800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?/span>

⑤ 量取 10 ml 250 mM KCl 溶解，加入到燒杯中。

⑥ 滴加 5 N NaOH（約 0.2 ml），調(diào)節(jié) pH 值至 7.0。

⑦ 加去離子水將培養(yǎng)基定容至 1 L。

SOC 培養(yǎng)基配制

1. 配制 1M 葡萄糖溶液：在 90ml 去離子水中溶解 18g 葡萄糖，充分溶解后定容