產(chǎn)品介紹

    NcmZol Reagent 適用于快速、直接從多種組織和細(xì)胞中提取總RNA的一種廣譜型試劑。NcmZol Reagent內(nèi)含優(yōu)化的異硫氰酸胍、酸性酚等物質(zhì)，能迅速破碎細(xì)胞，抑制細(xì)胞釋放出的核酸酶，最大限度地裂解樣品且同時保證RNA的完整性。加入氯仿離心后，溶液會分成三層：上層無色水相、中間層和下層紅色有機(jī)相，其中RNA分布在上清無色水相中。本試劑操作快速方便，顏色分明，提取的總RNA完整性好，純度高，無蛋白和DNA的污染，可用于各種分子生物學(xué)實驗，如RT-PCR、Real-time PCR、Dot Blot、Northern等。

 產(chǎn)品特色

? 使用范圍廣：對人、動物、植物和細(xì)菌組織提取均適用

? 操作快速：一個小時內(nèi)可完成純化步驟

? 顏色分明：溶液呈粉紅色，便于分離水相和有機(jī)相

? 提取純度高：DNA和蛋白質(zhì)污染最低，可用于多種下游實驗

? 產(chǎn)量高：最大程度地獲得樣品中的RNA

 操作步驟

準(zhǔn)備試劑（自備）：異丙醇、氯仿、75%乙醇（用DEPC處理的雙蒸水配制）、無RNase的水。

1. 各種材料樣本的勻漿處理

（a）貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞：吸去培養(yǎng)基，用PBS清洗一次，在培養(yǎng)板中直接加入適量的NcmZol Reagent（每10cm²生長的培養(yǎng)細(xì)胞中加入1ml的Ncmzol Reagent），水平放置片刻，便于裂解液均勻分布細(xì)胞表面裂解，再使用移液器吹打細(xì)胞并移至收集管中。

注意：（1）收集細(xì)胞數(shù)量不要超過1X10⁷/ml NcmZol Reagent；

（2）NcmZol Reagent加入量根據(jù)培養(yǎng)板面積確定，若是NcmZol Reagent加入量不足，可能導(dǎo)致提取的RNA中有DNA污染。

（b）懸浮培養(yǎng)細(xì)胞：將懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞和培養(yǎng)基一起倒入離心管中，離心收集細(xì)胞，每5X10⁶-1X10⁷動植物、酵母或細(xì)菌細(xì)胞加入1ml NcmZol Reagent。

注意：（1）部分酵母和細(xì)菌細(xì)胞可能需要勻漿儀或液氮研磨處理；

（2）加入NcmZol Reagent前不要洗滌細(xì)胞，以免RNA降解。

（c）動物、植物組織：取新鮮或-70℃冷凍的動植物組織在液氮中充分減碎研磨，將研磨成粉狀的樣品轉(zhuǎn)移至離心管中，每20-50mg組織加入1ml NcmZol Reagent，勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。

注意：（1）要在液氮等低溫下處理樣品組織，避免RNA降解；

（2）樣品體積一般不要超過NcmZol Reagent體積的10%。

2. 樣品在加入NcmZol Reagent 后用移液器反復(fù)吹打幾次，直至裂解液中無明顯沉淀，使樣品充分裂解。室溫靜置5分鐘，使得蛋白質(zhì)核酸復(fù)合物完全分離。

3. 向上述溶液中加入氯仿，每使用1ml NcmZol Reagent加入0.2ml氯仿，劇烈振蕩15秒，室溫靜置5分鐘。

4. 12,000g, 4℃離心15分鐘，此時樣品會分為三層：紅色有機(jī)相、中間層和上層無色水相。其中RNA主要在水相中，將水相（約500ul）轉(zhuǎn)移至一個新的RNase-Free的離心管中。

5. 在得到的無色水相的離心管中，每使用1ml NcmZol Reagent 加入0.5ml異丙醇（等體積的異丙醇），顛倒混勻，室溫靜置10分鐘。

6. 12,000g, 4℃離心10分鐘，棄去上清，在管壁和管底形成膠狀沉淀，即RNA。

7. 加1ml 75%乙醇（用DEPC處理的雙蒸水配制）洗滌沉淀，每使用1ml NcmZol Reagent 用1ml 75%乙醇，然后8,000g, 4℃離心5分鐘。

8. 棄去上清（為了獲得更純的RNA，應(yīng)盡量除盡乙醇），室溫晾干沉淀（大約5分鐘左右）。

9. 加入20-50ul的無RNase的水，充分溶解RNA，樣品保存于-70℃以備長期使用。

                                       操作示意圖

 保存條件

4℃保存，室溫運(yùn)輸，1年有效；

 注意事項

1. 預(yù)防RNase污染，降解RNA，如：使用無RNase的塑料制品和槍頭，操作時要戴一次性口罩和手套，實驗過程中要勤換手套。

2. 加入氯仿后，一定要充分振蕩，保證RNA提取的效果

3. 使用的樣本避免反復(fù)凍融，以免影響RNA的產(chǎn)率和質(zhì)量。

4. NcmZol Reagent含有苯酚，具有毒性和腐蝕性，使用本制品時要穿戴防護(hù)物品，避免吸入體內(nèi)、接觸皮膚、吞食等現(xiàn)象發(fā)生。如果不小心發(fā)生，應(yīng)立即用大量的水沖洗并前往醫(yī)院治療。