產(chǎn)品介紹

NcmDH5α Competent Cell 是新賽美生物研發(fā)的用特殊化學(xué)方制備的 DH5α感受態(tài)細(xì)胞， 相比于常規(guī)方法制備的感受態(tài)細(xì)胞，其轉(zhuǎn)化不需要冰浴、熱激和孵育等步驟，最快能在 30 秒內(nèi)完成轉(zhuǎn)化步驟。轉(zhuǎn)化步驟多樣性，可以實(shí)現(xiàn) 30 秒，5 分鐘及傳統(tǒng)步驟的轉(zhuǎn)化，效率可 達(dá) 108-109菌落數(shù)/ug 質(zhì)粒（pUC19），是實(shí)現(xiàn) DNA 克隆，文庫(kù)構(gòu)建等實(shí)驗(yàn)的理想產(chǎn)品。 

產(chǎn)品特色

轉(zhuǎn)化快：最快 30 秒快速轉(zhuǎn)化，不需冰浴、熱激和孵育步驟 ?

效率高：可達(dá)到 108-109 cfu/ug pUC19 DNA 

穩(wěn)定性好：-70 度冰箱可保存半年時(shí)間

NcmDH5a 基因型 

F-φ80lacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169deoRrecA1endA1hsdR17(rk-,mk+)phoAsupE44λ-thi-1gyrA96r elA1 

操作步驟 

（1）30 秒快速轉(zhuǎn)化 

1. 取 100ul 冰浴上融化的 NcmDH5α感受態(tài)細(xì)胞，加入目的 DNA（質(zhì)?；蛘哌B接產(chǎn)物），輕 輕混勻。 

2.向每個(gè)離心管中加入 200ul 無菌的 SOC 或者 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），輕柔地混勻。 

3. 吸取已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含氨芐抗生素的 LB 瓊脂培養(yǎng)基上，將細(xì)胞均勻涂開。將平 板置于 37℃至液體被稀釋，平板倒置，過夜培養(yǎng)。

注意：30 秒快速轉(zhuǎn)化的產(chǎn)物是攜帶氨芐抗性的質(zhì)粒；其他抗性的質(zhì)粒，開始步 驟一致，但加入 SOC 或 LB 培養(yǎng)基后，需在 37℃，200 rmp 的搖床上至少孵育 30 分鐘，然后再涂板。 

（2）5 分鐘轉(zhuǎn)化 

1. 取 100ul 冰浴上融化的 NcmDH5α感受態(tài)細(xì)胞，加入目的 DNA（質(zhì)?；蛘哌B接產(chǎn)物），輕 輕混勻，在冰浴中靜置 2 分鐘。

2. 42℃水浴中熱激 30 秒，然后快速將離心管轉(zhuǎn)移至冰浴中 2 分鐘，該過程不要振蕩離心管。

3. 向每個(gè)離心管中加入 200ul 無菌的 SOC 或者 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），輕柔地混勻。

4. 吸取已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含氨芐抗生素的 LB 瓊脂培養(yǎng)基上，將細(xì)胞均勻涂開。將平 板置于 37℃至液體被稀釋，平板倒置，過夜培養(yǎng)。

注意：5 分鐘快速轉(zhuǎn)化的產(chǎn)物是攜帶氨芐抗性的質(zhì)粒；其他抗性的質(zhì)粒，開始步 驟一致，但加入 SOC 或 LB 培養(yǎng)基后，需在 37℃，200 rmp 的搖床上至少孵育 30 分鐘，然后再涂板。

（3）傳統(tǒng)轉(zhuǎn)化步驟 

1. 取 100ul 冰浴上融化的 NcmDH5α感受態(tài)細(xì)胞，加入目的 DNA（質(zhì)?；蛘哌B接產(chǎn)物），輕 輕混勻，在冰浴中靜置 30 分鐘。

2. 42℃水浴中熱激 30 秒，然后快速將離心管轉(zhuǎn)移至冰浴中 2 分鐘，該過程不要振蕩離心管。

3. 向每個(gè)離心管中加入 900ul 無菌的 SOC 或者 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），輕柔地混勻后置 于 37℃，200rpm 搖床上孵育 1 小時(shí)，使細(xì)菌復(fù)蘇。

4. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，吸取不同體積或者離心濃縮后的已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加入含相應(yīng)抗生素 的 LB 瓊脂培養(yǎng)基上，將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于 37℃至液體被稀釋，平板倒置，過夜培 養(yǎng)。 轉(zhuǎn)化示意圖：轉(zhuǎn)化迅速，最快 30 秒即可完成轉(zhuǎn)化