產(chǎn)品介紹 

RIPA 即 Radio Immunoprecipitation Assay，是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液。新賽美生物的 RIPA 裂解液裂解所得的蛋白樣品可以用于常規(guī)的 Western、IP 等。主要成分是：50mMTris(pH 7.6)，150mM  NaCl，1% NP-40，0.5% sodiumdeoxycholate，0.1% SDS 等多種裂解劑和抑制劑，能有效地抑制蛋白 降解。 

操作步驟 

對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品： 

1. 取適當(dāng)量的NCM RIPA Buffer 裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。 

注意：NCM RIPA Buffer 不含蛋白酶等抑制劑，根據(jù)需要在使用前添加蛋白酶，磷酸酶等抑制劑。 2. a.對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有 干擾，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使 裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞 1-2 秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。 b. 對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。 如果細(xì)胞量較多，必需分裝成 50-100 萬細(xì)胞/管，然后再裂解。 

對(duì)于組織樣品：

1. 把組織剪切成細(xì)小的碎片。 

2. 融解 RIPA 裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF，使 PMSF 的最終濃度為 1mM。 

3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加 更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量)  

4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。 

5. 充分裂解后，10000-14000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。 

6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈渦旋使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

保存條件 

4℃保存，室溫運(yùn)輸，1 年有效；

注意事項(xiàng)：

1.RIPA 裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因 組DNA 等的復(fù)合物。在不檢測(cè)和基因組 DNA 結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清 用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明 膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果檢測(cè)一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如 NFκB、p53 等時(shí)，通 常不必進(jìn)行超聲處理，就可以檢測(cè)到這些轉(zhuǎn)錄因子。 

2．為獲得最佳的實(shí)驗(yàn)效果，可適當(dāng)分裝使用，以盡量避免反復(fù)凍融。 

3．PMSF 應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)加,需自備 PMSF。  

4．裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或 4℃進(jìn)行。 

5．蛋白酶抑制劑均有較高的毒性，為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。一旦直接接觸，請(qǐng)立即用流水沖洗，再向醫(yī)療保健機(jī)構(gòu)咨詢。